检测原理：
A.寡核苷酸引物偶联的抗体对与目的蛋白结合
将两种抗体偶联物：3’末端寡核苷酸和5’末端寡核苷酸，分别与两个靶标特异性抗体偶联。当抗体结合到分析物的两个不同表位时，3’和5’引物会彼此接近。
B.通过DNA连接酶连接两端引物，并通过qPCR进行扩增
只有当抗体对与蛋白结合时（A），对应的两端引物才能与互补的夹板寡核苷酸结合，并随后通过DNA连接酶彼此连接（B）引物。随着DNA模板在95 °C下“融解”，连接酶灭活，抗体和其他蛋白质都会变性，仅留下100个碱基的链接引物，其浓度与第一阶段抗体-蛋白结合的水平相应。将该链接引物进行40个qPCR循环的信号扩增。
检测工作流程及数据分析：
ProQuantum免疫检测技术的工作流程非常简单，与诸如ELISA的传统工作流程相比，孵育步骤更少，且无需洗涤步骤，分析检测可在2小时内完成。
A. 目的蛋白的结合：
- 先在工作板将抗体引物、样品等需稀释步骤的部分完成。
- 在检测板孔中加入5 μL体引物混合液。
- 在适当的孔中添加5 μL标准品或未知样品，室温孵育1小时。
B.进行qPCR
在所有检测板的孔中添加40 ¬μL qPCR反应预混液，并将检测板放入qPCR仪器进行连接酶反应、qPCR扩增及读数。
以上是在整个96孔板上运行三重复的5 ¬μL样品的示例。样品体积最少可至2μL。
C. 实验数据分析并提供实验报告
基于ProQuantum™分析软件对实验数据进行分析，包括标准曲线的计算拟合、离群值检测、4或5PL回归拟合、未知样品的结果计算（以pg/mL为单位）以及分组统计。
检测技术优势：
- 高灵敏度：相比传统方法，以更高的灵敏度检测低水平蛋白。
- 所需样本量小：样本使用量仅需2-5 µL。（对比其他方法如果是做重复检测，每孔使用量至少为75 μL）。
- 工作流程简单，操作便捷：从样本到获得实验结果仅需两个小时，无需清洗步骤，只需1小时即可完成孵育。
- 动态线性范围广：≥5log，尽可能避免稀释样本以使得结果能落在检测范围内。
- 无需购买昂贵的、专用的仪器：可在任何qPCR仪器上运行。
- 直观的数据分析：可全面进行数据分析和统计组间差异。
应用方向：
- 定量检测健康人血清中，低水平表达的细胞因子，用于早期生物标志物的检测。
- 非常适用于获取比较困难的样本检测，如鼻粘膜分泌物、眼泪、小鼠血液，检测仅需2-5 µL样本。
- 样本种属：人（有些检测可用于非人灵长类样本），小鼠；样本类型：已验证适用于血清、血浆、细胞培养上清的检测。
当前可检测因子：
ProQuantum免疫检测技术是将传统的ELISA技术与PCR检测结合延伸出的免疫检测手段，可轻松实现高性能靶标特异性蛋白检测。ProQuantum检测利用基于邻位连接测定（Proximity Ligation Assay，PLA™）技术，为分析物提供了抗体-抗原结合特异性以及qPCR信号检测和扩增功能，实现了高灵敏度的蛋白质表达量检测。与传统方法相比，ProQuantum检测可以通过较低的样品量检测低水平蛋白。ProQuantum检测流程十分简单，仅需一个抗体孵育步骤，将孔板放入任何qPCR仪器中即可进行信号检测，无需任何洗涤步骤。
