4D-DIA相对定量蛋白质组

　　DIA（data-independent acquisition），即数据非依赖采集技术，是近年来发展起来的一种新的质谱技术，隶属于非标记蛋白组学范畴。传统的质谱检测技术都是使用数据依赖采集模式（data-dependentﾠacquisition，DDA）来采集蛋白质谱数据，该模式需要从一级肽段中选择特定数量的肽段分子进行下游检测分析，而DIA通过在时间梯度上设置一定范围的质荷比窗口，对窗口下所有的肽段分子进行检测。该模式不涉及对肽段的限制性筛选，因此具有更好的定量准确性、覆盖度和重现性，适用于大规模样本的高度覆盖、稳定和可追溯地分析。利用新一代timsTOFﾠPro质谱仪开展的4D-DIA，同样可以更灵敏、更稳定地进行大队列样本检测，并实现检测各种不同基质中的蛋白质。

实验流程

本项目分析流程主要包括 DDA 建库与 DIA 分析两个阶段。 建立质谱实验分析流程主要包括蛋白质提取、肽段酶解、色谱分级、液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）DDA数据采集、数据库检索等步骤；正式实验阶段主要包括DIA数据采集、special library检索、质控分析、定性定量结果分析及生物信息学分析，见下图。

DIA 定量蛋白质组学实验流程图

技术特点

* 更快的速度，大于 120 Hz MS/MS，是实际样本分析扫描速度最快的质谱仪之一；
* 更高的灵敏度，利用离子淌度在时间和空间进行聚焦，使灵敏度提高了 20 倍，对微量样品适应性好；
* 更高的专属性，与传统 3D 质谱相比增加了离子淌度这一维度，可对待测蛋白进行四维鉴定和定量分析；
* 更高的峰容量，通过离子淌度维度的加入使峰容量增加了 10 倍，能鉴定到更多的蛋白组；
* 在任何速度下均能保持高分辨率;
* 性能稳定，耐脏，重现性好，为临床大队列研究提供保障。

样品要求

细胞样本：2×10⁷个细胞； 常规动物组织：30mg； 植物组织（柔软组织）：100mg； 微生物类（菌类）：50mg。