10x Genomics Visium空间转录组测序
产品简介
单细胞检测技术的发展为理解组织中细胞的组成与功能提供了手段。现有的方法虽能检测到细胞类型，却无法真实还原在组织中的空间位置信息，而空间位置信息对细胞间作用和微环境研究至关重要。空间转录组学技术的发展将传统组织学技术的优势与高通量RNA 测序技术相融合，为检测组织中的细胞空间位置与基因表达提供了一个强有力的检测手段。
10xﾠGenomicsﾠVisium空间转录组测序解决方案可检测完整组织切片中的mRNA，并对基因活跃表达的区域进行图谱绘制。该解决方案提供了基因表达定位的高分辨率视图，可应用于癌症、神经科学和发育生物学等多种领域。该技术在识别不同的细胞类型的同时，保留其空间位置信息，可以提供细胞功能、表型和组织微环境中位置关系等重要信息。
Visium空间转录组测序解决方案无需进行目标预设就可在空间上实现各种组织中基因表达的空间可视化。通过数据分析和数据可视化，将基因表达数据映射到H&E图像上，轻松实现对同一样品基因表达和细胞组成空间结构的表征，使得从组织切片中获得生物学的全貌成为了可能。
技术特点
1、平台稳定，不需要单细胞解离
2、一张芯片4个捕获区域，每个捕获区域在6.5x6.5mm2区域上包含约5000个条形码化的mRNA捕获点（每个点平均捕获1-10个细胞，具体取决于组织类型）
3、数据分析工具成熟
4、高分辨率，高灵敏度
5、组织兼容性强，大部分人、小鼠、大鼠组织都可用
6、实验周期短，一天可完成样本处理到建库
7、针对新鲜冷冻和FFPE样品进行了优化
8、可轻松与当前用于组织分析的实验室方法和工具有机结合
Visium空间转录组测序实验流程及捕获芯片设计（新鲜组织）
Visium空间转录组测序实验过程包括样本准备和文库构建两大部分。样本准备部分主要进行组织切片制备。文库构建部分主要进行组织固定，免疫组化染色，组织透化以及捕获标记mRNA，二代测序文库构建。
空间转录组捕获芯片由4个6.5X6.5mm2捕获点阵组成，每个点阵上包含有55μm直径，间距100μm的携带空间Barcodes、UMI和Poly(dT)的探针群。每张芯片可同时进行4张组织切片的检测。
Visium空间转录组测序实验流程及捕获芯片设计（FFPE样本）
实验流程：首先将FFPE组织切片放置在Visium基因表达芯片上，进行组织学成像（形态学背景的H&E染色或使用IF技术对蛋白共检测）。然后，用RTL探针集在组织中靶向杂交和连接，并用RNase酶处理和透化，与芯片上的捕获探针结合延伸。最后，进行建库测序和数据分析及可视化。
VisiumﾠforﾠFFPE阵列利用RNA模板连接技术（RTL），首先针对编码蛋白转录组基因设计特异性探针对，然后将探针对与组织内的靶标基因进行杂交，杂交后探针对互相连接。随后进行组织透化来释放组织中已连接在一起的探针对，并与芯片上的捕获探针结合，从而捕获到基因的表达信息。
可参考透化组织列表（新鲜组织）
说明：
“Tissues Optimized”:将组织冻存，OCT包埋，按《用户指南》实验即可
“Tissues for Further Optimization”: 可能需要探索其他的制备技术和透化
时间：组织存储，脱钙，替代包埋和切片参数
冰冻组织和FFPE组织的Visium空间转录组结果比较
分别使用小鼠脑的新鲜冰冻组织和FFPE组织进行空间转录组分析，结果如下：
1.两者的结果具有很高的相关性，说明两种检测方法具有可比性和高灵敏度。
2.在两种组织的结果中，Hpca 基因都在海马中表达并且与已知的表达模式一致，证明了Visium用于FFPE分析的特异性。
3.取自小鼠脑FFPE样本的连续切片的空间转录组分析结果，在聚类和总UMI数方面都显示出高度的重现性。
FFPE与新鲜冰冻组织结果比较。
A.两种组织测序饱和度。B.Hpca基因在两种组织的表达模式。C.FFPE连续切片的聚类结果和检测到的总UMI数。
