激光共聚焦显微镜之免疫荧光实验--什么是免疫荧光？

免疫荧光技术（Immunofluorescence）是一项基于免疫学、生物化学和显微成像检测的强大方法，下面对免疫荧光进行详细介绍。

01 定义与原理

免疫荧光技术，又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。其基本原理是利用抗原抗体反应的高度特异性，将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体（或抗原）上，与其相应的抗原（或抗体）结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。

02 直接免疫荧光和间接免疫荧光

直接免疫荧光：直接免疫荧光的实验步骤相对简单。它只需要将特异荧光抗体直接滴加于待检的标本上，然后荧光标记的抗体与抗原发生特异结合，使之呈现荧光。这种方法只需要一个标记步骤，因此实验方案较短。

间接免疫荧光：间接免疫荧光则相对复杂。它需要使用两个抗体，即一抗和荧光素标记的二抗。首先，将未标记的一抗加到已知抗原标本上，使抗原抗体充分结合。然后洗涤去除未结合的抗体，再加入荧光标记的二抗，二抗与一抗结合，从而间接地标记抗原。这种方法需要额外的操作步骤，特别是在多色实验中，需要选择适当的二抗，每个二抗需要靶向不同的物种并偶联至不同染料。

图片改编自：徕卡官网

https://www.leica-microsystems.com.cn/cn/science-lab/fluorescent-dyes/

03 特点

· 特异性强：由于抗原抗体反应具有高度的特异性，因此免疫荧光技术能够准确识别目标抗原或抗体。

· 敏感性高：荧光色素的标记使得抗原抗体复合物在荧光显微镜下易于观察，从而提高了检测的敏感性。

· 速度快：免疫荧光技术操作简便，能够在短时间内完成检测。

徕卡激光共聚焦拍摄免疫荧光处理的肝类器官

04 应用范围

直接免疫荧光：常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。

间接免疫荧光：间接免疫荧光法在基础生物学、临床免疫学诊断、生物医药研究、遗传学等多个领域都有着广泛的应用，其中在基础生物学领域可以通过细胞爬片、组织切片、石蜡切片等精确地在细胞或组织中定位和检测特定的蛋白质。

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