激光共聚焦显微镜之常用荧光标记--DNA染料

激光共聚焦显微镜以激光作为光源，激发组织细胞中荧光标记的分子和结构产生荧光信号，通过检测器收集信号从而进行高分辨率的成像。因此我们对不同荧光染料分别进行简单的介绍，帮助大家更快速的选择合适的染料。

细胞核，蓝色，DAPI

线粒体，绿色，Mito-Tracker-Green

DAPI（4',6-二脒基-2-苯基吲哚）是最常见的DNA染色剂之一，主要与DNA双螺旋富含A-T的区域结合。与未结合状态相比，DAPI在DNA上的荧光强度增加，可以被UV（紫外线）光激发，最大激发波长为358nm，峰值在461nm。DAPI也具有检测RNA结合的能力，这种结合的荧光强度相对较弱，发射光的波长范围会转移至约500nm。DAPI能够渗透完整的细胞膜，因此该染料既可用于被固定细胞也可用于活细胞。

SBC实验室特别提醒：DAPI染料在固定细胞染色中表现优异，推荐固定细胞染色使用DAPI染料。

Hoechst染料是第二种广泛使用的DNA染色方法，最初由德国化学公司Hoechst AG生产。Hoechst 33258、Hoechst 33342和Hoechst 34580都是邻苯二甲酰亚胺，具有向A-T富集区插入的趋势。与DAPI相似，此类染料受到紫外线激发并在455 nm下达到发射最大值，在无结合状态下变为510–540 nm。Hoechst染料也具有细胞渗透作用，因此可用于固定细胞和活细胞。与DAPI不同是，Hoechst染料毒性更低。

SBC实验室特别提醒：Hoechst染料细胞毒性更低，推荐活细胞染色使用Hoechst染料。

碘化丙啶（PI），是一种无法透过细胞膜的DNA染色剂。在细胞培养中，因为该染色剂无法进入完好的细胞内，所以常常被用来区分活细胞和死细胞。碘化丙啶也是一种结合剂，但对不同的碱基没有特异性。在核酸结合态下，其最大激发波长为538nm，最高发射波长为617nm。未结合状态下碘化丙啶的最大激发和发射被移到较短的波长和较弱的强度。PI也可以在不改变其荧光特性的情况下与RNA结合，因此可以在染色前加入核酸酶（如RNase）去除RNA的影响。

SBC实验室特别提醒：PI染料常用于固定细胞染色和流式细胞仪实验中。

吖啶橙（AO）可以通过结合量不同产生不同颜色的荧光来区分DNA和RNA。DNA结合的状态下其最大激发/发射对应为502nm/525nm，RNA结合的状态下最大激发/发射对应为460nm/650nm。此外，吖啶橙还可以作为凋亡细胞的标记物。因为凋亡细胞中染色质固缩或断裂形成凋亡小体，吖啶橙可以进入凋亡小体中，呈现致密或颗粒状荧光。

来源：徕卡官网https://www.leica-microsystems.com.cn/cn/science-lab/fluorescent-dyes/