SIMOA Homebrew方法开发专题（二）| 关于血浆NfL临床诊断价值的多中心验证研究

Simoa单分子免疫阵列分析技术是目前市面上最灵敏的蛋白分子检测技术，其可以检测单个蛋白分子，灵敏度达到飞克级别。在肿瘤、神经、感染免疫、心血管、炎症、生殖、眼科等领域都有着广泛应用。Simoa平台是一个开放的研究平台，除现有的商品化试剂盒之外，各领域的研究人员都可自行进行方法开发及分析。

来自英国伦敦和瑞典的科学家们利用自行研发的Simoa Homebrew试剂盒对血浆中的Nfl进行了检测和分析，文章发表于Nature Communications（IF=12.7）。

A multicentre validation study of the diagnostic value of plasma neurofilament light

实验方法

脑脊液和血浆中NfL浓度的增高意味着有神经退行性病变，本研究将NfL作为神经退行性病变的标志物对两组人群进行了检测，两组标本由伦敦国王学院（KCL，n = 805）和瑞典BioFINDER Study（n = 1,464）提供。根据检测所得的NfL浓度在13种神经退行性疾病、唐氏综合征（DS）、抑郁症等疾病中进行验证。

伦敦国王学院利用Quanterix商品化试剂盒，LLOQ 为0.174pg/mL，低浓度质控品的批内CV为7.5%，批间CV为12.8%；高浓度质控品的批内CV为9.5%，批间CV为13.8%。而瑞典BioFINDER Study则采用Homebrew的方式，抗体和质控品来源于瑞典UmanDiagnostics AB公司，制备所得的试剂盒的LLOQ 为6.7pg/mL，低浓度质控品的批内CV为5.5%，批间CV为8.2%；高浓度质控品的批内CV为9.3%，批间CV为9.4%。基于两组的QC数据，对Lund组中的所有样本做了1.18倍的校正，以用于所有后续分析。

实验结果

血浆NfL的浓度在所有皮质神经退行性疾病、肌萎缩侧索硬化症（ALS）和非典型帕金森病患者中显著升高，说明血浆NfL在临床上可用于鉴别帕金森病患者的非典型帕金森病、唐氏综合征患者的痴呆（DSAD）、精神疾病患者的痴呆以及认知障碍患者的额颞叶痴呆（FTD），此外，血浆NfL在所有年龄相关的切分中表现最好，假阳性率低。

图1. KCL（ King’s College London）和Lund（Swedish BioFINDER study）两组样本中诊断组和对照组的血浆NfL浓度。KCL（An=805）和Lund（Bn=1464）。

图2：血浆NfL对神经退行性疾病的诊断准确性。（A）KCL组；（B）Lund组。

图3：血浆NfL诊断神经退行性疾病和抑郁症的准确性。（A）对照组>65岁，（B）对照组<65岁，（C）抑郁症。

图4：血浆NfL切分所有年龄段的神经退行性疾病。（A）KCL组和（B）Lund组。

实验结论

本研究表明，血浆NfL浓度在多种神经退行性疾病中升高，但在ALS、FTD和DSAD患者的样本中浓度最高。虽然血浆NfL不能区分不同的认知障碍，但在帕金森病患者中，血浆NfL值高表示不典型的帕金森病，而在DS患者中，血浆NfL值高则可区分有无痴呆。此外，血浆NfL可以区分中度/重度抑郁症和神经再生障碍。

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